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液態(tài)奶和奶粉中三聚氰胺的測定
更新時間:2020-04-26   點(diǎn)擊次數(shù):2868次

依據(jù) GB /T 22388-2008

1. 前處理

預(yù)處理:
液態(tài)奶:取原料乳5g,于50ml 離心管中,分別加入500ul,10ppm 的標(biāo)準(zhǔn)液(保證每kg 原料乳中各含1mg 標(biāo)樣)、15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈,渦旋1min, 超聲20min,4500r/min 離心15min。取出上清液,用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振蕩均勻,從中取5ml,再加入5ml 水作為上樣液。

奶粉:取奶粉5g,于50ml 離心管中,分別加入500ul,10ppm 的標(biāo)準(zhǔn)液(保證每kg 奶粉中各含1mg 標(biāo)樣),15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈,渦旋1min,超聲1h,放置冰箱中2h,4500r/min 離心15min。取出上清液,用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振蕩均勻,從中取5ml,再加入5ml 水作為上樣液。
Ps:由于奶粉不含水份,相對與液態(tài)奶,脂類與其他添加成分可能更多,因此增加超聲時間及冷卻步驟,以保證蛋白沉降*。

凈化:
固相萃取小柱:
InertSep MPC 3ml/60mg 貨號5010-27121 或WondaSep MPC 3ml/60mg 貨號5010-MPC
活化:3ml 甲醇和5ml 水
上樣:前處理后,備用的上樣液
淋洗:3ml 水、3ml 甲醇
洗脫:6ml 5%氨水-甲醇
濃縮復(fù)溶:40 度氮?dú)獯蹈?,加?ml 3Mmol/L 醋酸銨溶液:乙腈=20:80 的流動相,濾膜
過濾后,HPLC 分析。

2. 色譜分析

色譜柱:Inertsil HILIC 5um 4.6*250mm
流動相:A—2 mmol/L 醋酸銨溶液 B—乙腈
梯度表如下:

表1 梯度表

時間2Mmol/L 醋酸銨溶液乙腈(%)
02080
102080
10.015050
205050
20.012080
302080

流速:1.0ml/min 柱溫:40℃ 進(jìn)樣量:10ul 檢測波長:240nm
儀器:Shimadzu LC-20A

3.基質(zhì)加標(biāo)回收率結(jié)果

三次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果(基質(zhì)加標(biāo)濃度均為1mg/kg):
—液態(tài)奶

表2 液態(tài)奶加標(biāo)回收率

名稱基質(zhì)加標(biāo)
回收率%RSD%
三聚氰胺98.380.89

—奶粉

表2 液態(tài)奶加標(biāo)回收率

名稱基質(zhì)加標(biāo)
回收率%RSD%
三聚氰胺97.711.93

4. 結(jié)論

在此實(shí)驗(yàn)條件下,采用固相萃取小柱InertSep MPC 3ml/60mg或WondaSep MPC 3ml/60mg 分 析原料乳與奶粉中的三聚氰胺,回收率*要求。

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